Инструкция по санитарно-микробиологическому контролю тушек, мяса птицы, птицепродуктов, яиц и яйцепродуктов на птицеводческих и птицеперерабатывающих предприятиях

Текст документа по состоянию на июль 2011 года
Страница 3 из 4

Несухие продукты без предварительной инкубации в фосфатном буфере сразу высевают (навеску 1 г) в пробирку с 9 куб. см солевого бульона. В случае необходимости производят посевы в пробирку с солевым бульоном из серии десятикратных разведений.

После термостатирования при температуре 37 °С в течение 24 ч из солевого бульона производят пересев петлей на чашки Петри с подсушенными средами типа Байрд-Паркер или ЖСА (желточно-солевой агар) для получения изолированных колоний. Чашки с посевами выдерживают в термостате при температуре 37 °С в течение 18 - 24 ч.

На среде Байрд-Паркер St. aureus растут в виде черных, блестящих, выпуклых колоний в диаметре 1 - 1,5 мм, окруженных зоной просветления среды шириной 1 - 3 мм. Колонии, образовавшие зоны просветления на среде Байрд-Паркер через 24 ч инкубации при 37 °С, в 90% случаев являются штаммами, образующими энтерококк. Эти колонии не требуют подтверждения в принадлежности к St. aureus и подлежат учету через 24 ч инкубации.

На ЖСА колонии St. aureus имеют форму выпуклых дисков диаметром 2 - 4 мм белого, желтого, кремового, лимонного, золотистого цвета с ровными краями, вокруг колоний образуются радужное кольцо и зона помутнения среды.

Из характерных колоний, подозрительных на St. aureus, готовят мазки-препараты, окрашивают по Граму и микроскопируют. Колонии грамположительных мелких кокков, расположенных в мазке гроздьевидно, отсеивают на сектора чашки Петри или в пробирки со скошенным МПА. Посевы выдерживают в термостате при 37 °С в течение 18 - 24 ч. Из культур, выросших на МПА, после предварительной проверки мазка на чистоту под микроскопом ставят реакцию плазмокоагуляции.

При этом берут две пробирки, в каждой из которых по 0,5 куб. см разведенной кроличьей плазмы. В одну пробирку вносят петлей исследуемую суточную агаровую культуру, другую пробирку оставляют незасеянной. Пробирки помещают в термостат при температуре 37 °С. Учитывают результаты через 2 - 4 ч и оставляют до утра при комнатной температуре для окончательного учета.

Пробирки на свертывание плазмы следует просматривать осторожно, чтобы не разрушить начало образования сгустка.

При учете реакции плазмокоагуляции могут наблюдаться три степени активности фермента коагулазы:

++++ - сгусток плотный;

+++ - сгусток, имеющий небольшой отсек;

++ - сгусток в виде взвешенного мешочка.

Все три варианта являются положительным результатом.

    Положительная  реакция  плазмокоагуляции  свидетельствует о присутствии
коагулазоположительных стафилококков в засеянной массе продукта (в 1 г/куб.
       -1
см)  10    г  и  т.д.,  а  отрицательная  реакция  плазмокоагуляции - об их
отсутствии.


СХЕМА ИССЛЕДОВАНИЯ ОБРАЗЦОВ НА НАЛИЧИЕ ПЛАЗМОКОАГУЛИРУЮЩИХ СТАФИЛОКОККОВ

----------------------                        -----------------------------
¦Посев проб (1 г или ¦                        ¦Посев проб сухого продукта ¦
¦    разведения)     ¦                        ¦   (1 г или разведения)    ¦
----------+-----------                        ---------------+-------------
          \/                                                 \/
----------------------                        -----------------------------
¦   Солевой бульон   ¦                        ¦Фосфатный буферный раствор ¦
¦(инкубирование 37 °С¦<-----------------------+   (инкубирование 37 °С    ¦
¦       24 ч)        ¦                        ¦        18 - 24 ч)         ¦
------------------+---                        -----------------------------
                  \/    на одну из сред
           -------------------------------------------------
           \/                                              \/
----------------------                        --------------------------
¦ Агар Байрд-Паркера ¦                        ¦ Желточно-солевой агар  ¦
¦(инкубирование 37 °С¦                        ¦ (инкубирование 37 °С   ¦
¦       24 ч)        ¦                        ¦      18 - 24 ч)        ¦
-----------+----------                        -------------+------------
           \/                                              \/
----------------------                        --------------------------
¦  Просмотр посевов  ¦                        ¦    Просмотр посевов    ¦
-----------+----------                        -------------+------------
           \/                                              \/
----------------------                        --------------------------
¦     ЗАКЛЮЧЕНИЕ     ¦                        ¦  Отбор подозрительных  ¦
----------------------                        ¦         колоний        ¦
                                              -------------+------------
                                                           \/
                                              --------------------------
                                              ¦   Мясопептонный агар   ¦
                                              ¦  (инкубирование 37 °С  ¦
                                              ¦        18 - 24 ч)      ¦
                                              -------------+------------
                                                           \/
                                              --------------------------
                                              ¦    Просмотр посевов    ¦
                                              -------------+------------
                                                           \/
                                              --------------------------
                                              ¦Реакция плазмокоагуляции¦
                                              ¦  (инкубирование 37 °С  ¦
                                              ¦ 4 ч, затем 18 - 25 °С  ¦
                                              ¦         12 ч)          ¦
                                              -------------+------------
                                                           \/
                                              --------------------------
                                              ¦       ЗАКЛЮЧЕНИЕ       ¦
                                              --------------------------


3.7. Определение спор мезофильных и термофильных клостридий, бацилл аэробных и факультативно-анаэробных микроорганизмов

К клостридиям относятся анаэробные бактерии, способные к спорообразованию в строго анаэробных условиях, растущие либо при 30 - 37 °С (мезофилы), либо при 55 - 65 °С (термофилы) и не образующие каталазу.

К бациллам относятся спорообразующие бактерии, способные развиваться как в аэробных, так и в анаэробных условиях (факультативные анаэробы), способные развиваться при 30 - 37 °С (мезофилы) либо при 55 - 65 °С (термофилы).

Подготовка проб для выделения спор. Пробирку с исследуемой навеской продукта или его разведениями помещают в водяную баню с температурой 50 °С. Воду в бане нагревают до достижения нужной температуры внутри продукта, которую определяют в контрольной параллельной пробирке.

Для выявления спор мезофилов пробу прогревают в течение 20 мин. при температуре внутри пробирки 80 °С; для спор термофилов - 20 мин. при 94 - 96 °С.

Выделение спор клостридий производят путем посева прогретого материала в пробирку с регенерированной средой Китт-Тароцци для термофилов или мезофилов.

Посевы мезофилов термостатируют при 30 °С 48 ч и более (до 5 суток), посевы термофилов - при (58 +/- 3) °С 24 - 48 ч (не более 72 ч) при 80-процентной влажности воздуха (для этого в термостат ставят сосуд с водой с открытой поверхностью).

Признаками роста клостридий являются образование мути, газа, возникновение постороннего запаха.

Посевы сразу после появления роста исследуют под микроскопом. Материал для приготовления препарата берут пипеткой со дна сосуда. При наличии в мазках грамположительных палочек со спорами ставят каталазную пробу (ГОСТ 10444.3-85). Отрицательная проба на каталазу свидетельствует о присутствии в среде облигатных клостридий.

Для окончательного заключения о присутствии клостридий в посевах 1 куб. см культуры из пробирки со средой Китт-Тароцци вносят в чашку Петри, заливают 40 куб. см питательного агара с глюкозой и тщательно перемешивают. Сразу после застывания агара на его поверхность пинцетом кладут стерильное предметное стекло так, чтобы под ним не было пузырьков воздуха. Затем чашку переворачивают крышкой вниз и ставят в термостат для мезофилов - с температурой 30 °С на 24 - 48 ч; для термофилов - с температурой (58 +/- 3) °С на 24 - 48 ч.

Облигатные клостридии растут на чашке под стеклом в центральной части, отступая от края стекла на 1 - 3 мм, образуя под стеклом пузырьки газа и (или) разрывы агара. Факультативные анаэробы растут под стеклом в виде сплошной зоны и по всей поверхности чашки.

Допускается пересев со среды Китт-Тароцци (1 куб. см культуральной жидкости) в стерильную пробирку с заливкой высоким столбиком (11 - 12 см) глюкозным питательным агаром. После застывания агара пробирки термостатируют, как описано выше для пересевов в чашки Петри под стекло. В пробирках анаэробы растут в глубине агара, отступая от поверхности 0,5 - 1,5 см, часто с разрывом среды.

Выделение спор бацилл (аэробов и факультативных анаэробов) производят путем глубинного посева прогретого материала в чашки Петри и заливкой агаризованной средой. Для выделения спор бацилл-мезофилов используют питательный агар с глюкозой, для термофилов - картофельно-пептонный агар. Чашки с посевами бацилл-мезофилов термостатируют при 30 °С 72 ч и более (до 5 суток), термофилов - при (58 +/- 3) °С не более 72 ч.

При появлении колоний на чашках Петри проводят микрокопирование с окраской мазков по Граму.

При обнаружении в посевах грамположительных споровых палочек проводят реакцию на каталазу (ГОСТ 10444.3-85). Бациллы и мезофилы, и термофилы образует каталазу.

Для бацилл-термофилов определяют кислотообразующую способность. Для этого либо на стекле готовят водную суспензию из исследуемой колонии и в эту суспензию добавляют каплю индикатора, либо капают индикатором непосредственно на колонию в чашке Петри. В качестве индикатора используют 0,04-процентный раствор бромкрезолпурпура. Изменение цвета индикатора из сине-фиолетового в желтый указывает на присутствие в посевах кислотообразующих бацилл-термофилов.

Для выявления спор бацилл-мезофилов допускается использование мясопептонного бульона, спор бацилл-термофилов - картофельно-пептонного бульона.



4. ПИТАТЕЛЬНЫЕ СРЕДЫ

4.1. Среды для определения общего количества мезофильных аэробных и факультативно-анаэробных микроорганизмов

    4.1.1. Сухой питательный агар                           - 35,0 г
           (Даг НПО "Питательные среды")
           Сухой экстракт кормовых дрожжей                  - 2,5 г
           Глюкоза                                          - 1,0 г
           Вода дистиллированная                            - 1000 куб. см.

Довести pH до 7,0, стерилизовать 20 мин. при 121 °С.

4.1.2. Мясопептонный (агар) бульон с глюкозой

К 1 куб. дм мясопептонного бульона (агара) перед стерилизацией добавляют 1 г или 10 г глюкозы, устанавливают pH 7,0 - 7,2 и стерилизуют 20 мин. при 121 °С.

4.1.2.1. Мясопептонный бульон (агар)

10 г пептона и 5 г хлористого натрия добавляют к 1 куб. дм мясной воды. Устанавливают pH 7,0 - 7,2, кипятят, фильтруют через бумажный фильтр. Стерилизуют 20 мин. при 121 °С. При выпадении осадка в мясопептонном бульоне его вторично фильтруют с последующей стерилизацией. Для приготовления мясопептонного агара в 1 куб. дм мясо-пептонного бульона перед стерилизацией добавляют 15 - 20 г агара и кипятят на слабом огне при постоянном помешивании до полного растворения агара. Устанавливают pH 7,0 - 7,2, разливают в пробирки или флаконы и стерилизуют 20 мин. при 121 °С.



4.2. Среды и реактивы для обнаружения бактерий группы кишечных палочек (колиформных бактерий)

4.2.1. Среда Кесслер (с лактозой)

К 1 куб. дм водопроводной воды добавляют 10 г пептона, 50 куб. см стерильной бычьей желчи. Смесь кипятят на водяной бане при помешивании 20 - 30 мин. Затем фильтруют ее через ватно-марлевый фильтр, добавляя 2,5 г лактозы; доводят объем водой до 1 куб. дм. Устанавливают pH 7,4 - 7,6, используя 1 Н растворы NaOH или HCl и проверяя значения pH на потенциометре или универсальной бумагой. Добавляют 2 куб. см 1-процентного водного раствора генцианового фиолетового, разливают по 10 куб. см в пробирки с поплавками. Стерилизуют 15 мин. при 121 °С.

4.2.2. Сухая среда Кесслер (модифицированная) производства Литовского филиала ВНИИМС (ТУ 49-365-76) с учетом изм. N 2 от 01.05.85

Подготовку среды для посева проводят согласно прописи на этикетке.

4.2.3. Среда Хейфеца (с лактозой)

В 1 куб. дм водопроводной воды растворяют 10 г пептона, 5 г хлористого натрия, 5 г лактозы, устанавливают pH 7,4 - 7,6, нагревают до кипения, фильтруют, добавляют 1 куб. см 5-процентного спиртового раствора розоловой кислоты и 2,5 куб. см 0,1-процентного раствора метиленового голубого. Сразу разливают по 10 куб. см в стерильные пробирки с поплавками и стерилизуют 20 мин. при 112 °С.

Для приготовления розоловой кислоты 0,5 г порошка заливают 10 куб. см этилового ректификованного спирта; через 24 ч раствор готов к употреблению. Раствором можно пользоваться в течение месяца со дня приготовления.

Для приготовления метиленового голубого 0,1 г порошка заливают 100 куб. см дистиллированной воды. Через сутки раствор готов к употреблению. При хранении свойства его не изменяются, срок хранения не ограничен.

Краски хранят в темном месте при комнатной температуре.

4.2.4. Среды Эндо, Левина

Среды Эндо и Левина выпускаются в сухом виде Дагестанским НПО "Питательные среды". Их следует готовить согласно прописям, указанным на этикетках банок. Изготовленные и разлитые в стерильные чашки Петри среды можно хранить при температуре 4 °С до 10 суток.



4.3. Среды и реактивы для определения сальмонелл

4.3.1. Среды предварительного обогащения

4.3.1.1. Пептонно-буферная вода

    калия дигидрофосфат (KH PO )                            - 0,45 г
                           2  4
    натрия гидрофосфат, безводный (Na HPO )                 - 5,34 г
                                     2   4
    пептонная вода (1 г пептона + 1000 куб. см              - 1000 куб. см.
    дистиллированной воды)
    Приготовление: ингредиенты смешивают, разливают в пробирки или флаконы,
стерилизуют в автоклаве при 121 °С 30 мин.
    4.3.2. Среды обогащения
    4.3.2.1. Среда Мюллера (тетратионатовый бульон Мюллера)
    мел, стерилизованный сухим жаром,                       - 45 г
    или кальция карбонат (CaCO ) сухой стерильный           - 25 г
                              3
    бульон Хоттингера, содержащий 120 - 130 мг%             - 900 куб. см
    аминного азота (или мясопептонный бульон)
    раствор Люголя                                          - 20 куб. см
    натрия тиосульфат (Na S O  х 5H O) (часто неправильно   - 100 куб. см.
                         2 2 3     2
    именуют гипосульфитом), 50-процентный стерильный раствор
    Приготовление: в стерильные флаконы помещают по 4,5 г мела, стерилизуют
сухим  жаром,  после  чего  в  каждый флакон наливают по 90 куб. см бульона
Хоттингера. Стерилизуют при 121 °С 30 мин. (pH 7,2 - 7,4). Затем ex tempore
асептически  добавляют в каждый флакон точно по 2 куб. см раствора Люголя и
по  10 куб. см раствора натрия тиосульфата, хорошо смешивают и разливают по
пробиркам. Готовая среда стерилизации не подлежит.
    Приготовление раствора Люголя:
    калия йодид (KI)                                        - 20 г
    йод кристаллический (I )                                - 25 г
                          2
    вода дистиллированная                                   - 100 куб. см.
    Приготовление 50-процентного раствора натрия тиосульфата
    В  измерительный  цилиндр  насыпают 50 г натрия тиосульфата и добавляют
воду  до 100 куб. см, растворяют, переливают во флакон, стерилизуют текучим
паром 30 мин.
    4.3.2.2. Среда Кауфмана
    среда Мюллера (стерильная)                              - 500 куб. см
    желчь бычья (стерильная)                                - 250 куб. см
    бриллиантовый зеленый (0,1-процентный водный раствор)   - 50 куб. см.
    Приготовление:   ингредиенты   смешивают,   асептически   разливают   в
стерильные пробирки по 10 куб. см, дополнительно не стерилизуют.
    Приготовление 20-процентного желчного бульона
    бульон мясопептонный или Хоттингера                     - 800 куб. см
    желчь бычья нативная                                    - 200 куб. см.
    Приготовление:  pH  должен  быть  равен 7,6. Разливают по 50 куб. см во
флаконы с поплавками. Стерилизуют текучим паром три дня по 30 мин.
    4.3.2.3. Магниевая среда (или хлормагниевая среда)
    Среда состоит из трех растворов:
    Раствор I:
    пептон                                                  - 4,2 г
    натрия хлорид (NaCl)                                    - 7,15 г
    калия дигидрофосфат (KH PO )                            - 1,48 г
                           2  4
    дрожжевой диализат                                      - 9 куб. см
    вода дистиллированная                                   - 890 куб. см.
    Раствор II:
    магния хлорид (MgCl  х 6H O)                            - 35,7 г
                       2     2
    вода дистиллированная                                   - 90 куб. см.
    Раствор III:
    бриллиантовый зеленый, 0,5-процентный водный раствор    - 0,9 куб. см.

Приготовление: все три раствора смешивают в указанных количествах, разливают в необходимых объемах в колбы, флаконы или пробирки, стерилизуют при 112 °С 30 мин.

4.3.2.4. Селенитовый бульон

I вариант. Среду готовят из двух основных растворов: А и Б.

Раствор А состоит из 5 г пептона чешской фирмы "Спофа" или венгерской фирмы "Рихтер", 7 г безводного двузамещенного фосфорнокислого натрия, 3 г однозамещенного фосфорнокислого натрия, 4 г х.ч. лактозы, 100 куб. см дистиллированной воды, pH 6,9 - 7,1. Раствор стерилизуют 30 мин. при температуре 112 °С.

Раствор Б состоит из 10-процентного раствора кислого селенистокислого натрия, приготовленного на стерильной воде. Раствор готовят непосредственно перед употреблением.

При изменении серии любого из входящих в среду компонентов (пептона, кислого селенистокислого натрия, фосфатов) производят предварительную подтитровку, для чего экспериментально определяют точную пропорцию фосфорнокислого двузамещенного безводного натрия и фосфорнокислого однозамещенного натрия, которая с используемыми образцами пептона и селенистокислого натрия дает pH не выше 6,9 - 7,1, что регулируется изменением соотношения фосфатов.

Для приготовления селенитовой среды в 50 куб. см раствора А стерильно добавляют 2 куб. см раствора Б. Среду разливают в стерильные пробирки по 3 - 7 куб. см, но не стерилизуют.

    II вариант. Селенитовый бульон с аминопептидом
    бульон аминопептидный                                   - 960 куб. см
    натрия гидрофосфат (Na HPO )                            - 8 г
                          2   4
    натрия дигидрофосфат (NaH PO )                          - 2 г
                             2  4
    натрия гидроселенит (NaHSeO ), 10-процентный            - 40 куб. см.
                               3
    водный раствор

Приготовление: реакцию среды не устанавливают, т.к. pH может колебаться в пределах 7,1 - 7,2. Стерилизуют при 112 °С 20 мин. Непосредственно перед употреблением добавляют 40 куб. см стерильного 10-процентного водного раствора гидроселенита (pH при этом снижается на 0,1 - 0,2), среду хорошо перемешивают и асептически разливают в стерильные пробирки по 5 куб. см.

Примечание: фосфаты натрия могут быть заменены фосфатами калия в тех же количествах.



    Приготовление аминопептидного бульона
    аминопептид                                             - 250 куб. см
    натрия хлорид (NaCl)                                    - 5,5 г
    вода дистиллированная                                   - 750 куб. см.

Приготовление: среду хорошо перемешивают, стерилизуют при 21 °С 20 мин. Готовый бульон можно хранить в бутылях неопределенный срок, желательно при 6 - 10 °С.

4.3.3. Дифференциально-диагностические среды для пересевов со сред обогащения

4.3.3.1. По степени подавления роста посторонней микрофлоры различают среды:

    - высокоселективные - висмут-сульфитный агар;
    - среднеселективные - среда Плоскирева, слабощелочной питательный агар;
    - низкоселективные  - среды Эндо, Левина.
    4.3.3.2.   Среды   Эндо,  Левина,  Плоскирева,  висмут-сульфитный  агар
выпускаются в сухом виде. Способ приготовления указан на этикетке.
    4.3.4. Среды для первичной идентификации
    4.3.4.1. Комбинированная среда по Олькеницкому
    агар питательный сухой                                  - 25 г
    лактоза                                                 - 10 г
    аммоний-железо (II) сульфат (FeSO  х (NaH )  х 6H O)    - 0,2 г
                                     4       4 2     2
    натрия тиосульфат (Na S O  х 5H O)                      - 0,3 г
                         2 2 3     2
    мочевина                                                - 10 г
    феноловый красный (0,4-процентный водный раствор)       - 4 куб. см
    вода дистиллированная                                   - 1000 куб. см.

Приготовление: соли предварительно растворяют в небольшом объеме дистиллированной воды. Углеводы и мочевину также растворяют в небольших объемах воды при подогревании в водяной бане. Сухой питательный агар расплавляют в оставшемся объеме воды при нагревании и помешивании. Затем все ингредиенты соединяют, перемешивают с расплавленным агаром, фильтруют через марлевый фильтр, устанавливают pH 7,2 - 7,4, добавляют индикатор и разливают в пробирки по 6 - 7 куб. см. Среду стерилизуют текучим паром 3 дня подряд по 20 мин. и скашивают, оставляя столбик 2 - 2,5 см. Готовая среда бледно-розового цвета.

4.3.4.2. Агар Клиглера

Коммерческую сухую среду готовят в соответствии с указаниями на этикетке препарата. Готовая к употреблению среда имеет красновато-бурый или оранжево-красный цвет, при скашивании следует оставлять столбик высотой 2 - 2,5 см.

4.3.4.3. Среда Ресселя

Приготовление среды Ресселя (сухой) указано на этикетке.

4.3.5. Среды и реактивы для биохимической дифференциации сальмонелл

4.3.5.1. Среды Гисса (среды с углеводами)

Выпускаются коммерческие сухие среды с углеводами (глюкозой, лактозой, мальтозой, сахарозой и маннитом). Их приготовление указано на этикетке.

4.3.5.2. Реактив Орлиха (на индол)

Взвешивают 5 г парадиметиламидобензальдегида в стеклянном стакане вместимостью 100 куб. см, помещают в коническую колбу вместимостью 200 куб. см и растворяют в 50 куб. см этилового спирта. С помощью мерного цилиндра вместимостью 100 куб. см медленно добавляют 50 куб. см концентрированной соляной кислоты. Раствор хранят в колбе с притертой пробкой при температуре 4 °С.

4.3.5.3. Реактив Ковача (на индол)

В 75 куб. см амилового спирта растворяют 5 г парадиметиламидобензальдегида, затем медленно добавляют 25 куб. см концентрированной соляной кислоты. Реактив хранят в колбе с притертой пробкой из темного стекла при температуре 4 - 8 °С.

4.3.5.4. Приготовление индикаторной бумаги для определения сероводорода

В 100 куб. см дистиллированной воды растворяют 20 г уксусно-кислого свинца и 1 г двууглекислого натрия. Этим раствором пропитывают полоски фильтровальной бумаги, высушивают их при температуре 18 - 23 °С и нарезают на узкие полоски. После приготовления бумага остается белой; при наличии сероводорода чернеет.

4.3.6. Агглютинирующие сальмонеллезные сыворотки

Необходимые разведения сыворотки готовят перед использованием согласно прилагаемой к коробке инструкции.



4.4. Питательные среды и реактивы для определения сульфитредуцирующих клостридий

4.4.1. Среда Китт-Тароцци

    мясопептонный бульон                                    - 1000 куб. см
    глюкоза                                                 - 10 г
    агар                                                    - 1,5 г
    кусочки печени или рыбы, или мяса вареные               - 1 куб. см.

Приготовление: стерильные пробирки заполняют на 1 - 1,5 см кусочками вареной печени или мяса, или рыбы и заливают приготовленным мясопептонным бульоном с глюкозой и агаром (в 1000 куб. см МПБ вносят 10 г глюкозы и 1,5 г агара, который при нагревании постепенно расплавляют). Высота слоя МПБ в пробирках 12 - 13 см. Пробирки со средой стерилизуют 20 мин. при 121 °С. pH среды после стерилизации должен быть 7,1.

При приготовлении среды впрок вместо добавления к ней агара на поверхность среды перед стерилизацией в пробирки наслаивают 0,5 - 1,0 см вазелинового масла.

При применении среды Китт-Тароцци без добавления в нее агара или вазелинового масла на поверхность среды после окончания посева наслаивают голодный агар или парафиновую смесь высотой 1,0 - 1,5 см.

При посевах в свежеприготовленную среду Китт-Тароцци (не более 3 сут. с момента приготовления) добавлять агар, вазелиновое масло или наслаивать на ее поверхность голодный агар не обязательно.

4.4.1.1. Приготовление вареной говяжьей печени

500 г говяжьей печени режут на куски массой по 30 - 40 г, заливают водой и кипятят в течение 15 - 20 мин. Воду сливают, куски печени разрезают на кусочки массой 1,5 - 3,0 г, заливают водой, подщелоченной двууглекислым натрием до pH 7,2 - 7,4, и кипятят, не допуская бурного кипения. Общее количество добавленной воды 1000 куб. см. Затем печень промывают в дуршлаге под струей воды в течение 1 ч и два-три раза дистиллированной водой.

Кусочки печени раскладывают во флаконы, заливают водой и стерилизуют 20 мин. при 120 °С.

4.4.1.2. Масло вазелиновое

Масло разливают по 20 - 50 куб. см в пробирки или колбы и стерилизуют 20 мин. при 120 °С.

Применяют для наслаивания на жидкие питательные среды для анаэробных микроорганизмов.

4.4.1.3. Агар голодный

2,0 г агара растворяют в 98 куб. см дистиллированной воды, стерилизуют 20 мин. при 120 °С.

4.4.1.4. Парафиновая смесь

Растапливают равные количества парафина и вазелинового масла, смешивают и стерилизует горячим воздухом при температуре 140 °С в течение 60 мин.

Применяют для наслаивания на жидкие питательные среды для анаэробных микроорганизмов.

4.4.2. Среда Вильсон-Блера

На дистиллированной воде готовят 20-процентный раствор серноватистокислого натрия и 8-процентный раствор хлористого железа. Оба раствора кипятят.

100 куб. см 3-процентного мясопептонного агара растапливают на водяной бане и добавляют 1 г глюкозы, 10 куб. см 20-процентного раствора серноватистокислого натрия и 1 куб. см 8-процентного раствора хлористого железа. Среду разливают в пробирки по 7 куб. см.

4.4.3. Среда Вильсон-Блера (модифицированная для анаэробов)

    мясо-пептонный агар с 1% глюкозы                        - 100 куб. см
    натрий сернистокислый (Na SO ), 20-процентый раствор    - 10 куб. см
                             2  3
    железоаммонийные квасцы Fe(KH ) х (SO )  х 12H O,       - 1,0 куб. см.
                                 4       4 2      2
    5-процентный раствор
    К  расплавленному  и  охлажденному  до  80  °С   мясопептонному агару с
глюкозой   добавляют   асептически   растворы   сернистокислого   натрия  и
железоаммонийных   квасцов   (растворы  сернистокислого  натрия  и  квасцов
стерилизуют при температуре (115 +/- 1) °С 30 мин.  либо готовят на горячей
(75  +/-  5)  °С  стерильной  дистиллированной  воде;  растворы хранению не
подлежат),  pH  готовой  среды  при  25  °С  составляет  7,7 +/- 0,1. Среду
разливают по (18 +/- 2) куб. см в чашки Петри и используют после застывания
и подсушивания при температуре (37 +/- 1) °С в течение 3 - 4 ч.
    4.4.4. Среда Роберта
    бульон мясопептонный стерильный                         - 25 куб. см
    желатин                                                 - 30 г
    агар                                                    - 1 г
    калий фосфорнокислый двузамещенный (K HPO )             - 2 г
                                         2   4
    калий азотнокислый (KNO )                               - 2 г
                           3
    2,3,5-трифенилтетразолиум хлорид, 1-процентный          - 10 куб. см.
    водный раствор
    В воду вносят фосфорнокислый калий, азотнокислый калий, агар и желатин,
дают  набухнуть желатину и нагревают на водяной бане до полного растворения
желатина и агара, добавляют стерильный  мясопептонный бульон и 1-процентный
раствор  2,3,5-трифенилтетразолиум  хлорида  (1 г 2,3,5-трифенилтетразолиум
хлорида  вносят  в  мерную  колбу  вместимостью  100 куб. см, доводят объем
дистиллированной  водой  до  метки).  Устанавливают pH среды таким образом,
чтобы  после  стерилизации  он составлял при 25 °С 7,1 +/- 0,1. Стерилизуют
трое  суток  подряд при температуре (100 +/- 1) °С 20 мин.  либо однократно
при  температуре  (110  +/-  1)  °С  15  мин.  Готовая  среда  должна  быть
бесцветной. Среду хранят при температуре (3 +/- 2) °С не более 7 дней.
    4.4.5. Среда сульфитжелезная полужидкая
    МПБ                                                     - 100 куб. см
    дрожжевой экстракт сухой или                            - 1 г
    -"-       -"-      жидкий                               - 5 г
    сульфит натрия, водный раствор (допускается заменить    - 1 куб. см
    сульфит натрия Na SO  на гипосульфит натрия
                     2  3
    Na S O  х 5H O в количестве 1 г на 1000 куб. см среды;
      2 2 3     2
    цитрат железа на FeCl  в тех же концентрациях)
                         3
    железо лимоннокислое (цитрат), 5-процентный             - 1 куб. см.
    водный раствор
    К  МПБ  добавляют  дрожжевой  экстракт  и  агар, устанавливают pH таким
образом,  чтобы  после  стерилизации его показатель составлял при 25 °С 7,1
+/- 0,1, и стерилизуют  при  температуре  (121  +/-  1)  °С  15  мин. После
стерилизации и регенерации добавляют горячие (70 - 80 °С) растворы сульфита
натрия  и  лимоннокислого  железа,  стерилизованные  или  приготовленные на
стерильной  дистиллированной воде. Среду перемешивают, разливают в пробирки
по 10 - 12 куб. см и используют для посева.
    4.4.6. Среда улучшенная клостридиальная (A.C.N.)
    мясной экстракт                                         - 10 г
    дрожжевой экстракт сухой или                            - 3 г
    -"-       -"-      жидкий                               - 15 г
    крахмал растворимый                                     - 1 г
    глюкоза                                                 - 5 г
    хлорид натрия                                           - 5 г
    гидрохлорид L-цистенна                                  - 0,5 г
    уксусно-кислый натрий безводный (NaCH COOH) или         - 3 г
                                         3
    уксусно-кислый натрий водный (NaCH COOH х 3H O)         - 5 г
                                      3         2
    агар                                                    - 15 г.

В воде растворяют все ингредиенты при нагревании, охлаждают до (50 +/- 5) °С, устанавливают pH таким образом, чтобы он составлял при 25 °С 7,0 +/- 0,1, разливают в пробирки, стерилизуют при температуре (115 +/- 1) °С 20 мин. Среду перед высевом регенерируют. Хранят при температуре (6 +/- 2) °С не более 7 дней.



4.5. Среды для определения бактерий рода протей

4.5.1. Среда жидкая селективная (Калины Г. и Комаровой Л.)

Основа среды: к 1 куб. дм мясопептонного бульона добавляют 1 г маннита, 50 куб. см натуральной бычьей желчи или эквивалентное количество сухой желчи, 0,8 г калия гидроортофосфата, 2 куб. см раствора кристаллического фиолетового (приготовленного: 1 г/куб. дм х 0,1 г кристаллического фиолетового переносят в мерную колбу вместимостью 100 куб. см, растворяют в дистиллированной воде; раствор доливают до метки), 2 куб. см спиртового раствора бромтимолового синего (1,6 г бромтимолового синего переносят в мерную колбу вместимостью 100 куб. см и растворяют в 96-процентном этаноле; раствор доливают до метки этанолом). Устанавливают pH таким образом, чтобы после стерилизации он составлял 6,9 +/- 0,1 при 25 °С. Стерилизуют текучим паром при 100 °С в течение 15 мин.

Для приготовления среды к основе добавляют асептически 10 куб. см раствора мочевины (50 г мочевины на 100 куб. см дистиллированной воды, раствор доливают до метки) и 100000 ЕД полимиксина B сульфата или 120000 ЕД полимиксина M сульфата. Среду разливают в стерильные пробирки по 5 куб. см. Хранят при (3 +/- 2) °С не более 7 суток. Готовая среда прозрачная, желто-бурого цвета.



Дифференциально-диагностические плотные среды

4.5.2. Агар дезоксихолат-цитрат лактозный по Leifson в модификации Hynes.

Основа среды: в 1 куб. дм кипящей мясной воды растворяют 5 г пептона, 10 г лактозы, 22,5 г агара, охлаждают до (45 - 50) °С, устанавливают pH таким образом, чтобы при 25 °С он составлял 7,4 +/- 0,1. Прибавляют 0,03 г нейтрального красного, разливают мерно по колбам, стерилизуют при (115 +/- 1) °С в течение 20 мин. Хранят при температуре (3 +/- 2) °С не более 7 суток.

Для приготовления питательной среды к расплавленной и охлажденной до (45 - 50) °С основе прибавляют из расчета на 100 куб. см основы 5 куб. см раствора солей (17 г натрия цитрата, 1 г натрия тиосульфата, 2 г цитрата железа помещают в мерную колбу вместимостью 100 куб. см, растворяют в дистиллированной воде; раствор доводят до метки и выдерживают на водяной бане при (60 +/- 1) °С в течение 1 ч; раствор хранят при комнатной температуре не более 3 мес.) и 5 куб. см раствора дезоксихолата натрия (10 г натрия дезоксихолата переносят в мерную колбу вместимостью 100 куб. см, растворяют в дистиллированной воде; раствор доливают до метки и выдерживают на водяной бане при (60 +/- 1) °С в течение 1 ч; раствор хранят при комнатной температуре не более 3 мес.).

Среду перемешивают и разливают по стерильным чашкам Петри по ГОСТ 26670. Среду используют в день ее приготовления.

4.5.3. Агар дифференциально-диагностический (Калина Г. и Комаровой Л.)

К 1 куб. дм расплавленного мясопептонного агара добавляют 15 куб. см дрожжевого экстракта, 10 г маннита, 10 г мальтозы, 80 куб. см натуральной бычьей желчи или эквивалентное количество сухой желчи, 2 г железа (III) цитрата, 0,05 г натрия тиосульфата, 0,5 куб. см раствора кристаллического фиолетового, 2 куб. см щелочного раствора фенолового красного (щелочной раствор фенолового красного массовой концентрацией 16 г/куб. дм; 1,6 г фенолового красного растворяют в мерной колбе вместимостью 100 куб. см в растворе натрия гидроокиси массовой концентрацией 100 г/куб. дм, раствор доливают раствором натрия гидроокиси до метки); раствор антибиотика (раствор полимиксин B сульфата или полимиксин M сульфата готовят непосредственно перед использованием, для этого во флакон со стерильным антибиотиком вносят 5 или 10 куб. см стерильной дистиллированной воды и 120000 ЕД полимиксина M сульфата или 100000 ЕД полимиксина B сульфата).

Среду стерилизуют текучим паром (при 100 °С) в точение 15 мин. и разливают после охлаждения по стерильным чашкам Петри. Среду хранят при (4 +/- 2) °С не более 7 суток. Готовая среда оранжево-красного цвета.

4.5.4. Среда для расщепления фенилаланина

15 куб. см дрожжевого экстракта, 2 г Д-фенилаланина фосфорнокислого двузамещенного, 5 г натрия хлорида, 12 г агара растворяют в 1 куб. дм кипящей дистиллированной воды. По 5 куб. см среды разливают в пробирки, стерилизуют при (121 +/- 1) °С 10 мин., дают застыть в наклонном положении. Среду хранят при (3 +/- 2) °С не более 7 суток.

4.5.5. Раствор хлорного железа

    Массовой концентрацией 100 г/куб. дм; 16,6 г (FeCl  х 6H O) переносят в
                                                      3     2
мерную  колбу вместимостью 100 куб. см, растворяют в дистиллированной воде.
Раствор доливают до метки.

4.5.6. Агар тройной сахарный с цитратом железа

В 1 куб. дм мясопептонного бульона растворяют при нагревании 15 куб. см дрожжевого экстракта, 10 г пептона, 10 г лактозы, 10 г сахарозы, 1 г глюкозы, 0,3 г железа (III) цитрата, 0,3 г натрия тиосульфата, 0,024 г фенолового красного, 15 г агара. Устанавливают pH таким образом, чтобы после стерилизации он составлял при 25 °С 7,4 +/- 0,1. Разливают в пробирки по 10 куб. см и стерилизуют при температуре (121 +/- 1) °С в течение 10 мин., дают застыть в наклонном положении, чтобы максимальная высота столбика составляла 2,5 см. Среда имеет коричнево-красную окраску. Хранят при комнатной температуре не более 7 суток.



4.6. Среды и реактивы для обнаружения плазмокоагулирующих стафилококков

4.6.1. Солевой бульон

К 100 куб. см мясопептонного бульона (МПБ) с pH 7,2 - 7,4 в колбе вместимостью 200 куб. см добавляют 6,5 г хлористого натрия и разливают в пробирки по 10 куб. см. Стерилизуют в автоклаве при 121 °С в течение 20 мин.

4.6.1.1. Мясопептонный бульон

По п. 4.1.2.

4.6.2. Желточно-солевой агар (ЖСА)

Основа - солевой агар: к мясопептонному бульону (МПБ) с pH 7,2 - 7,4 добавляют 2% агара и 6,5% хлористого натрия, расплавляют на водяной бане, при необходимости фильтруют через ватно-марлевый фильтр, разливают мерным цилиндром по 100 куб. см в колбы вместимостью 250 куб. см и стерилизуют при 121 °С в течение 30 мин. Получают солевой агар. Вместо мясопептонного бульона можно использовать сухой питательный агар, добавив к нему 6,5% хлористого натрия.

ЖСА: на 100 куб. см стерильного расплавленного и остуженного до 45 °С солевого агара добавляют 20 куб. см эмульсии яичного желтка. После полного размешивания желточно-солевой агар разливают в стерильные чашки Петри по 20 - 25 куб. см и хранят в холодильнике до 5 - 7 дней.

4.6.2.1. Эмульсия яичного желтка

На дно стерильной чашки Петри помещают куриное яйцо, которое тщательно протирают ватой, смоченной этиловым спиртом. Стерильным пинцетом пробивают с двух противоположных сторон яйца два отверстия. Через одно из этих отверстий из яйца полностью удаляют белок, а затем, несколько увеличив отверстие, выливают желток в стерильную колбу вместимостью 200 куб. см. К желтку постепенно добавляют (частями по 20 - 30 куб. см) 180 - 200 куб. см стерильного физиологического раствора, затем содержимое тщательно встряхивают до получения гомогенной массы.

4.6.3. Агар типа Байрд-Паркер

30 г сухого питательного агара на основе ферментативного гидролизата кормовых дрожжей Дагестанского НПО "Питательные среды" размешивают в 1 куб. дм дистиллированной воды, добавляют 10 г пирувата натрия, 5 г хлористого лития, тщательно перемешивают и кипятят в течение 1 мин. до полного растворения ингредиентов. Устанавливают pH 7,2. Разливают во флаконы объемами 100 - 200 - 300 куб. см в зависимости от потребности и стерилизуют при 121 °С 15 мин. Среда может храниться в течение месяца в условиях холодильника. Перед употреблением в растопленную и охлажденную до 45 - 50 °С среду с соблюдением правил асептики прибавляют (из расчета на 100 куб. см среды) 0,5 куб. см 2-процентного раствора теллурита калия и 5 куб. см эмульсии яичного желтка. Среду тщательно перемешивают и разливают в чашки Петри в объеме не менее 20 куб. см на чашку. Чашки со средой могут быть использованы в течение 24 ч, максимум 48 ч. Перед посевом чашки со средой подсушивают в термостате общепринятым способом.

4.6.4. Цитратная плазма кролика

Цитратная плазма кролика для реакции плазмокоагуляции выпускается в сухом виде. Готовят непосредственно перед употреблением согласно прописи в прилагаемом наставлении.



4.7. Среды для определения спор клостридий, спор аэробных и факультативно-анаэробных микроорганизмов

4.7.1. Среда Китт-Тароцци

По п. 4.4.1.

4.7.2. Среда Китт-Тароцци с углекислым кальцием, дрожжевым экстрактом и аскорбиновой кислотой

Готовят среду Китт-Тароцци с углекислым кальцием, но в мясопептонный бульон перед фасовкой вносят 2 г сухого дрожжевого экстракта или 10 куб. см жидкого дрожжевого экстракта. Перед анализом в регенерированную среду Китт-Тароцци с углекислым кальцием и дрожжевым экстрактом асептически вносят аскорбиновую кислоту из расчета 100 мкг на 1000 куб. см среды.

4.7.2.1. Среда Китт-Тароцци с углекислым кальцием

В пробирку или флаконы, предназначенные для среды Тароцци, добавляют на дно щепотку углекислого кальция, стерилизуют горячим воздухом по ГОСТ 26668-85, закладывают в них кусочки мяса или печени и заливают мясопептонным бульоном с глюкозой, приготавливая среду далее как просто Китт-Тароцци.

4.7.3. Мясопептонный агар (бульон) с глюкозой

По п. 4.1.2.

4.7.4. Бульон (агар) картофельно-пептонный

    картофель                                                  - 200 г
    пептон                                                     - 5 г
    хлорид натрия                                              - 5 г
    агар (если необходимо)                                     - 15 - 20 г.

200 г очищенного и нарезанного кусочками картофеля заливают 1 куб. дм водопроводной воды, кипятят 15 - 20 мин., не допуская разваривания кусочков, фильтруют через ватно-марлевый фильтр и доводят объем фильтрата до первоначального. В фильтрате растворяют 5 г пептона, 5 г хлорида натрия и расплавляют при нагревании 15 - 20 г агара. Устанавливают pH 7,1 +/- 0,1. Разливают в колбы и пробирки и стерилизуют при температуре (125 +/- 1) °С в течение 30 мин.

Рекомендуется контролировать стерильность среды, термостатируя ее при (59 +/- 1) °С 48 ч.

4.7.5. Печеночно-глицериновая среда

К 1 куб. дм печеночного бульона добавляют 5 г глицерина, 5 г глюкозы, разливают в пробирки или флаконы с кусочками печени (20 - 30 г печени на 100 куб. см среды), устанавливают pH 7,0 +/- 0,1 и стерилизуют при температуре (121 +/- 1) °С в течение 20 мин.



5. ЛАБОРАТОРНАЯ ДОКУМЕНТАЦИЯ

Все данные по микробиологическому контролю производства и санитарного состояния записывают в соответствующие лабораторные журналы.

Лабораторные журналы должны быть прошнурованы, страницы пронумерованы и скреплены печатью вышестоящей организации.

Журналы хранятся у микробиолога. По истечении 3 лет вся документация сдается по акту в архив предприятия.

Формы журналов даны в приложениях.



Генеральный директор
НПО "Комплекс"
В.В.ГУЩИН

Заведующий лабораторией
санитарно-гигиенической
оценки сырья и продуктов
А.А.ГУСЕВ

6. ПРИЛОЖЕНИЯ

Приложение 1



ЖУРНАЛ микробиологического контроля санитарного состояния производства



N п/п

Дата анализа

Наименование исследуемого объекта

Размер исследуемой поверхности

БГКП

ОМЧ (КОЕ/ кв. см)

Микроорганизмы по показаниям производства и требованиям ветсанслужбы

Заключение, предложения

Подпись бактериолога

1

2

3

4

5

6

7

8

9



Приложение 2



ЖУРНАЛ микробиологического контроля мяса птицы, потрохов, полуфабрикатов, рецептурных компонентов, используемых в производстве



N п/п

Дата ана- лиза

Наиме- нование проб

Постав- щик

ОМЧ (КОЕ/г)

Наличие сальмонелл в 25 г

Протей

Споры клостридий

Споры бацилл в 1 г

Заклю- чение

Подпись бакте- риолога

Среда накоп- ления

ВСА

Реакция с поливалентной сывороткой

СРК

мезо- филов

термо- филов

мезо- филов

термо- филов

1

2

3

4

5

6

7

8

9

10

11

12

13

14

15

16



Приложение 3



ЖУРНАЛ микробиологического контроля продуктов сублимационной сушки и готовых колбасно-кулинарных изделий



N п/п

Дата ана- лиза

Наименование исследуемого продукта

Определяемые бактериологические показатели

Заклю- чение, пред- ложения

Подпись бакте- риолога

ОМЧ (КОЕ/г)

БГКП

Наличие сальмонелл в 25 г восстановленного продукта

Сульфитредуцирующие клостридии в 0,1 г

Патоген- ные ста- филокок- ки в 1 г продукта

Наличие протея

среда накоп- ления

ВСА, мазки

реакция с поливалентной сывороткой

вегетатив- ные формы

споровые формы

1

2

3

4

5

6

7

8

9

10

11

12

13

14



Примечание: О проведении дополнительных исследований по показателям, не указанным в таблице, проводить запись в разделе "Заключение".



Приложение 4



ЖУРНАЛ микробиологического контроля санитарного состояния производства консервов



N п/п

Дата

Визуальная оценка санитарного состояния, контролируемого цеха, линии, отдельных участков производства

Место отбора пробы для анализа

Определяемые бактериологические показатели

Предложения по улучшению санитарного состояния и подпись микробиолога

Отметка о приня- тых мерах и подпись ответст- венного лица

контролиру- емый участок или оборудо- вание

удовлет- воритель- ное или неудовле- твори- тельное

общая обсеме- ненность

бактерии группы кишечных палочек

термофилы или другие специфические возбудители порчи в смывах с оборудования

1

2

3

4

5

6

7

8

9

10



Приложение 5



ЖУРНАЛ микробиологического контроля производства консервов



N п/п

Дата ана- лиза

Смена и час анализа

Наиме- нование консер- вов

Конт- роль- ный этап произ- водст- ва

pH про- дукта

Темпе- ратура про- дукта при отборе проб

Общая обсе- менен- ность

Наличие спор

Предпо- лагаемые причины повышения бактерио- логической обсеменен- ности

Какие меры и кому реко- мендо- ваны

Подпись бакте- риолога

мезофилы

термофилы

аэро- бов

рост на среде Тароцци

рост на чашках под стеклом

аэро- бов

ана- эробов

1

2

3

4

5

6

7

8

9

10

11

12

13

14

15

16

 1 2 3 4 

Комментарии
Комментирование через социальные сервисы Facebook и Вконтакте:

Курсы валют ЦБР

23.08.201924.08.2019
EUR72.831272.6243
USD65.619665.6046
UAH2.623362.61743
KZT0.1699880.169738
GBP79.708180.0639
CNY9.260599.26318
JPY0.6166970.615341

Интересные новости